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作者：刘彦峰;欧晓晴;贺赛男;唐兰兰;赵飞扬;廖瑛;仇旭升;谭磊;宋翠萍;丁铲;孙英杰;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所;扬州大学兽医学院;福建农林大学动物科学学院;
摘要：本研究利用CRISPR-Cas9技术构建DEAD/H-box解旋酶超家族中DDX46敲除细胞，并评估DDX46敲除对新城疫病毒(NDV)复制和抗病毒免疫的影响。首先针对DDX46共设计3条sgRNA，构建重组LentiCRISPRv2-DDX46质粒，包装慢病毒并感染HeLa细胞，使用嘌呤霉素进行筛选，最后进行亚克隆筛选。通过测序以及Western blot验证，结果表明共得到2株杂合子DDX46敲除细胞系。NDV分别感染野生型和DDX46敲除细胞，结果显示NDV复制在DDX46敲除细胞中受到显著抑制，而干扰素β和下游干扰素刺激因子的表达量则显著增加，表明NDV感染细胞后，DDX46显著抑制宿主天然免疫，并促进病毒复制。上述研究为DDX46调控抗病毒先天性免疫的研究奠定了基础。
关键词：CRISPR/Cas9;;DDX46;;新城疫病毒;;先天性免疫
基金资助：国家自然科学基金优秀青年科学基金项目(32122085);; 国家重点研究开发计划(2022YFD1801500)
