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作者：陈玲玲;范瑞文;何雷;贾琼;秦蓉芬;陈玉红;李雷斌;黄袁慧;刘玉良;李义平;王传彬;
单位：广西大学动物科学技术学院;中国动物疫病预防控制中心;山西农业大学动物医学学院;中山大学中山医学院热带病防治研究教育部重点实验室;
摘要：登革病毒(DENV)是一种经伊蚊传播的人兽共患病毒，目前没有特异性抗DENV药物和安全且高效的疫苗。为制备可中和DENV的纳米抗体，本研究构建血清Ⅱ型DENV(DENV-2)特异性噬菌体展示文库，并筛选DENV E蛋白特异性纳米抗体。首先将灭活并浓缩的DENV-2免疫羊驼，采血分离外周血单核细胞(PBMC)并提取总RNA，通过RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)并克隆入pCANTAB-5E质粒，构建成DENV特异性纳米抗体噬菌体展示文库，然后，以DENV-2 E蛋白为抗原淘筛纳米抗体库，将筛选到的2个VHH片段克隆入pPICZαA载体后在毕赤酵母(GS115株)中表达，并纯化抗体，最后，鉴定纯化的纳米抗体与E蛋白的反应性。结果显示：成功构建库容为9.1×10~8个的噬菌体展示文库；经3轮淘筛获得1株与DENV-2 E蛋白特异结合的纳米抗体DV2-Nb2。本研究为DENV诊断和抗体药物研发提供实验技术基础。
关键词：血清Ⅱ型登革病毒;;E蛋白;;纳米抗体;;噬菌体展示
基金资助：中山大学热带病防治研究教育部重点实验室开放基金
