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作者：范修齐;王志豪;孔兰芳;鲁壮壮;蒋蔚;陈兆国;韩先干;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所;安徽农业大学;塔里木大学;
摘要：衣康酸是由巨噬细胞通过炎症刺激促使顺乌头酸脱羧酶生成，衣康酸具有免疫调节、抗氧化、抗炎和杀菌作用，开展衣康酸检测方法研究，是研究其调控作用的关键。沙门菌转录因子RipR(STM3121基因编码)可通过结合STM3121启动子抑制其转录活性，而RipR与衣康酸结合后可解除其抑制作用。基于此调控方式，可将表达绿色荧光蛋白的报告基因AmCyan、STM3121及其启动子3个元件串联后构建衣康酸检测质粒，通过检测AmCyan的转录活性，可实现对衣康酸的定性检测。因此，本研究首先通过重叠PCR技术，将AmCyan、STM3121及其启动子序列克隆至pACYC184质粒中，成功构建衣康酸检测质粒pACYC184-STM3121-AmCyan。其次，为了评价该质粒对衣康酸的检测作用，将其转化DH5α，成功获得DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan衣康酸检测模型菌株。最后，向该模型菌株分别添加外源和内源性(大肠杆菌感染RAW264.7巨噬细胞后的细胞裂解液)2种方式产生的衣康酸，验证该质粒对衣康酸的检测作用。结果表明，二者均可成功诱导DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan模型菌株产生绿色荧光，而对照组不产生。本研究成功建立衣康酸检测方法，为后续开展衣康酸生物学功能研究提供技术支撑。
关键词：衣康酸;;沙门菌RipR;;荧光报告基因;;检测方法
基金资助：政府间国际科技创新合作重点项目(2018YFE0102200);; 国家自然科学基金(32072829)
