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作者:成玉婷;焦琳琳;吴庆国;朱善元;
单位:江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心;南京农业大学教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室;
摘要:为探讨鸭坦布苏病毒(DTMUV)201909株在不同细胞中的适应性,本研究以DTMUV-201909株感染4种不同细胞系(DEF、DF-1、BHK21和Vero),并用TCID_(50)、RT-PCR和IFA方法分析DTMUV增殖情况。结果显示:DTMUV在DEF和DF-1细胞中复制能力较BHK21和Vero细胞强;利用一步克隆技术获得DTMUV Capsid重组真核表达载体并瞬时转染至DEF细胞;PCR扩增获得Capsid片段大小为360 bp;Western blot显示重组质粒在细胞内表达的融合蛋白分子质量大约为16 kDa;IFA观察到DTMUV Capsid在细胞质和细胞核中均有分布;将DTMUV Capsid质粒转染至DEF细胞,发现IFN-α、IFN-β和IFN-γ表达分别升高3.78、2.31和1.82倍,MAVS、TLR3和RIG-I表达分别降低49.5%、62.3%和73.1%。本研究为进一步阐明DTMUV的分子致病机理奠定基础,也为深入研究DTMUV Capsid蛋白的结构与功能提供了材料。
关键词:鸭坦布苏病毒;;衣壳蛋白;;细胞适应性;;亚细胞定位
基金资助:江苏省高等学校自然科学研究面上项目(22KJB230005);; “凤城英才”青年科技人才托举工程项目(泰科协发[2021]45号);; 江苏农牧科技职业学院校级科研课题(NSF2021CB05);; 江苏省大学生创新创业训练计划项目(202112806011Y)