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作者：鲁壮壮;连丽燕;王志豪;林秋;范修齐;孔兰芳;蒋蔚;陈兆国;陈伟;韩先干;
单位：塔里木大学生命科学与技术学院;中国农业科学院上海兽医研究所;
摘要：wbkC基因编码布鲁菌脂多糖O-链合成必需的甲酰基转移酶，开展其免疫原性研究，可为开发布鲁菌亚单位疫苗及诊断技术提供候选靶标。本研究通过生物信息学分析后扩增wbkC基因，构建其表达质粒，进行蛋白表达，并利用Western blot检测WbkC的免疫反应性；通过对BALB/C小鼠免疫WbkC，评价其诱导小鼠抗体及细胞因子产生水平。结果显示：成功构建表达质粒pCold I-wbkC，获得大小约31 kDa的重组蛋白，并与布鲁菌阳性血清具有免疫反应性；在免疫小鼠后的7、21、35、49 d均可产生抗WbkC抗体，且在35 d达到最高水平；利用荧光定量PCR和ELISA分别对小鼠细胞因子的转录和表达水平进行检测，与对照组相比，免疫组IL1-β(P<0.01)、IL-6(P<0.01)、TNF-α(P<0.0001)、IFN-β(P<0.05)转录水平上调，免疫组血清中的IL-6、IFN-β和TNF-α的含量分别升高1.41、3.32和9.32倍，而IL-Iβ的含量没有变化。本研究表明WbkC蛋白具有多个B细胞、T细胞位点，结构复杂，是免疫原性蛋白；该蛋白可产生较高的抗体水平，能显著提升小鼠细胞因子的含量及脾脏细胞中的转录水平，表明其可诱导小鼠体液和细胞免疫应答，为后续以WbkC蛋白为靶标开展布鲁菌亚单位疫苗和诊断方法研究提供参考。
关键词：布鲁菌;;wbkC基因;;免疫原性;;细胞因子检测
基金资助：上海科技创新行动计划(22N41900500)
