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作者：刘华凤;曾杏梅;董哲岳;丰宇晨;朱智明;余双庆;董小岩;
单位：北京锦篮基因科技有限公司;北京五加和基因科技有限公司;
摘要：建立生物样本中9型腺相关病毒（Adeno-associated virus type 9,AAV9）结合抗体的体外检测方法，验证该方法的临界值、灵敏度、精密度、特异性和药物耐受性指标。建立间接酶联免疫吸附方法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA），用健康人血清、AAV9载体基因药物干预的小鼠免疫血清对方法的关键性能进行验证。该检测方法对人血清样本的筛选临界值（Screening cut point,SCP）是1.50，滴度临界值（Titer cut point,TCP）是2.46，确证临界值（Confirmation cut point,CCP）是45.75%，灵敏度是75.79 ng/mL，批间精密度变异为7.28%。未检测到5μg/mL的抗AAV5小鼠单抗、抗AAV8小鼠单抗特异性结合AAV9载体。高、中、低浓度的质控样品均可耐受AAV9病毒颗粒的药物浓度为1×10~9 CP/mL。检测5只给药小鼠血清，给药前血清AAV9结合抗体筛选阴性；给药后28d血清抗体筛选阳性；再经确证实验，28 d血清8 000倍稀释后，AAV9病毒颗粒抑制率均>CCP，为确证阳性；测得抗体滴度是1∶128 000～1∶256 000。本研究建立的AAV9结合抗体ELISA检测方法符合《药物免疫原性研究技术指导原则》要求，可用于以AAV9为载体的基因药物临床试验样本中AAV9结合抗体的检测。
关键词：AAV9;ELISA;结合抗体;生物分析
