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作者：朱昱茜;石正旺;罗俊聪;陈婕;林永玉;席韬;张帆;石鑫泰;郑海学;包世俊;田宏;
单位：甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院家畜疫病病原生物学国家重点实验室;
摘要：为制备南非2型口蹄疫病毒型特异性单克隆抗体，本研究通过原核系统表达南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白，亲和层析的方法纯化目的蛋白。将纯化的VP1蛋白使用弗氏佐剂乳化后，免疫BALB/c小鼠，待加强免疫后取血清效价最稳定的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞进行融合，应用间接ELISA筛选针对南非2型VP1蛋白的单克隆抗体。采用特异性试验、叠加试验和抗体亚型鉴定等方法对筛选的单克隆抗体特性进行分析。结果发现，本研究成功表达南非2型VP1蛋白，筛选出2株能稳定分泌特异性针对南非2型VP1蛋白的杂交瘤细胞株（3B2和6F2），其亚型分别为IgG2a和IgG1，叠加试验结果表明2株单抗的叠加系数>40%，说明两株单抗针对不同的抗原位点；单抗的效价可达1∶256 000，特异性试验证明2株单抗均不与O型、A型口蹄疫病毒及其他常见猪病病毒产生交叉反应。由此可见，本研究制备的单克隆抗体具有良好的特异性和反应性，为南非2型口蹄疫病毒定型诊断和未来疫苗的研制奠定了基础。
关键词：南非2型;口蹄疫病毒;VP1蛋白;特异性单克隆抗体
基金资助：科技部国家重点研发计划项目（项目号：2021YFD1800300）,题目：口蹄疫病毒的分子流行病学与传播机制; 科技重大专项-国家重点实验室重组项目（项目号：22ZD6NA001）,题目：家畜重要疫病感染与免疫防控的基础理论研究; 2022年甘肃省创新联合体项目（项目号：22ZD6NA012）,题目：家畜重要疫病诊断研制与产业化; 十四五广东省揭榜挂帅项目（项目号：2023SDZG02）,题目：重大动物疫病新型综合防控技术; 国家生猪技术创新中心先导科技项目（项目号：NCTIP-XD/C03）,
