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作者：杜松;舒相华;姚俊;袁红;张雪;宋春莲;
单位：云南农业大学;云南省畜牧兽医科学院;
摘要：猪札幌病毒（Porcine sapovirus,PoSaV）是一种引起猪急性胃肠炎的肠道病毒，对于生猪养殖业造成严重威胁。PoSaV感染猪只表现出的症状与其他腹泻病毒引起的症状相似，难以区分。为了检测该病毒并了解其在猪场中的流行情况，我们建立了一种PoSaV检测方法。本研究根据GenBank中GIII基因型，设计引物，优化反应条件，通过特异性评价，灵敏度和重复性检测，建立荧光定量RT-PCR方法。本试验从贵州省获取20份腹泻母猪肛拭子样品，通过RT-PCR进行检测，并进行VP1全基因扩增测序，使用MEGA7.0进行系统进化树构建和同源性分析。结果显示，建立的荧光定量RT-PCR检测方法具有较强特异性和高灵敏度，在拷贝值为1×101·μL-1时可以达到普通RT-PCR方法 100倍以上的检出限。此外，该方法具有良好的重复性和稳定性，批内变异系数与批间变异系数均小于1%；在检测猪腹泻临床样本中发现阳性率为85%(17/20)。将获得的17条VP1全基因序列与国内外14条参考毒株进行比对，结果显示：所有测序毒株与参考序列核苷酸同源性介于81.0%-99.2%，氨基酸同源性介于80.8%-97.6%，并且均与美国经典Cowden毒株亲缘性较远。所有测序毒株与YNAN、YNAN2020亲缘性较近，其中5株（GZ-VP1-3、GZ-VP1-5、GZ-VP1-6、GZ-VP1-9、GZ-VP1-11）与云南省分离株YNAN核苷酸及氨基酸同源性为99.2%、96.9%-97.6%，亲缘性最为亲近，表明可能由一个原始毒株进化而来。测序毒株均在同一分支上亲缘性较近，但核苷酸及氨基酸同源性在91.8%-100%，显示VPl基因存在一定程度变异。本研究成功建立一种PoSaV检测方法，深入分析了当前毒株的遗传变异情况，对PoSaV防控有着一定的启示作用。
关键词：猪札幌病毒;荧光定量PCR;VP1基因;遗传进化分析
基金资助：国家重点研发专项省部联动项目（项目号：2022YFD1601901）,题目：香格里拉市迪庆藏猪产业提质增效关键技术集成与示范~~
