来源：期刊VIP网 时间：
作者：李海;宋煜;吴汉;李桂珍;陈纯;李海涛;邵敏;王晓虎;扈荣良;周鹤峰;
单位：遵义医科大学珠海校区生物工程学院;广东省农业科学院动物卫生研究所;军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所;
摘要：利用非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）p30、p72和MGF360-12L重组蛋白及其酶标单克隆抗体（Monoclonal antibodies, mAbs），建立一种快速、准确检测ASFV抗体的竞争ELISA法。分别利用纯化的ASFV p30、p72和MGF360-12L重组蛋白免疫BALB/c小鼠，通过聚乙二醇（PEG）诱导融合获得阳性杂交瘤细胞，腹水经辛酸-硫酸铵法纯化得到相应的mAbs，并使用HRP标记，建立竞争ELISA法并优化反应条件，对该法的临界值、敏感性、特异性和符合率进行评估。制备的p30、p72和MGF360-12L重组蛋白纯度良好，融合后的细胞株经Western blot鉴定具有良好的反应性和特异性，筛选的杂交瘤细胞株均为IgG类抗体，纯化后的mAbs符合抗体IgG分子量大小，经HRP标记后活性较高。竞争ELISA优化结果显示，血清与酶标mAbs最佳稀释倍数分别为1∶8和1∶3 200，临界值判定PI≤14.71%为阴性，PI≥18.97%为阳性，在14.71%≤PI≤18.97%期间为可疑，试剂盒敏感性为1∶128，经检测临床样品表明符合率极高。成功建立了ASFV抗体的快速检测方法，为ASFV的预防和大规模血清样品检测提供有效监测工具，并为ASFV疫苗免疫效果评估提供有效技术手段。
关键词：非洲猪瘟病毒;单克隆抗体;竞争ELISA;p30;p72;MGF360
基金资助：贵州省科技计划项目（项目号：黔科合支撑[2023]一般259）,题目：新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原快速检测试剂盒的研制~~
