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作者：栾可轩;李方正;黄玉风;郇延军;孙铭菊;蒋南;
单位：青岛农业大学动物医学院;
摘要：为了探究钟基因在脂肪细胞成脂分化过程中的表达规律，试验对猪去分化脂肪(dedifferentiated fat, DFAT)细胞进行体外成脂诱导培养，分别于诱导第0,7,15天时使用倒置显微镜观察细胞的分化情况，同时用油红O染色剂染色并进行观察；采用实时荧光定量PCR方法检测培养第0,7,15天的细胞中钟基因(Bmal1、Clock、Per2、Cry1和Rev-erbα)、成脂关键因子(PPARγ)和脂肪细胞因子(瘦素和脂联素)mRNA的相对表达量，并采用ELISA方法检测细胞上清液中瘦素和脂联素含量，分析成脂分化过程中瘦素和脂联素分泌量的变化。结果表明：成脂诱导前猪DFAT细胞呈长梭形，胞质均匀且无脂滴分布；诱导第7天猪DFAT细胞逐渐变为椭圆形，胞质内有许多较小脂滴分布；诱导第15天其形态逐渐变为圆形，胞质中脂滴明显增多并融合为较大脂滴。油红O染色可见细胞内脂滴被染为红色。随着诱导时间的增加，Bmal1和Cry1基因mRNA相对表达量呈逐渐升高的趋势，Clock和Rev-erbα基因mRNA相对表达量呈先升高后降低的趋势，Per2基因mRNA相对表达量呈先下降后升高的趋势；PPARγ、瘦素和脂联素mRNA相对表达量均呈逐渐升高的趋势。在体外培养的猪DFAT细胞均能够分泌瘦素和脂联素且二者的分泌量均随着诱导时间的增加呈逐渐升高的趋势。说明猪DFAT细胞在体外有良好的成脂分化能力；在细胞成脂诱导过程中，5种钟基因(Bmal1、Clock、Cry1、Per2和Rev-erbα)表达的变化趋势不尽相同，其中Bmal1、Cry1与PPARγ、瘦素和脂联素表达趋势相同，推测PPARγ可能是联系生物钟与脂肪形成和代谢的重要因子。
关键词：猪去分化脂肪细胞;;成脂分化;;钟基因;;成脂关键因子;;脂肪细胞因子
基金资助：国家自然科学基金项目(32202756;32072802;32272969);; 泰山学者工程专项经费资助项目(tsqn202211191)
