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作者：任爱华;董彦伯;苗润芝;吕俞娇;刘岩峰;
单位：北华大学基础医学院解剖教研室;北华大学临床医学院外科教研室;
摘要：目的：探讨不同剂量灵芝酸A(GAA)对非小细胞肺癌（NSCLC） PC9细胞的生物活性、糖酵解及其限速酶表达的影响，并阐明其作用机制。方法：体外培养NSCLC PC9细胞，将PC9细胞分为空白对照组、低剂量（25μmol·L~(-1)） GAA组、中剂量（50μmol·L~(-1)） GAA组和高剂量（100μmol·L~(-1)） GAA组。采用噻唑蓝（MTT）法检测各组PC9细胞存活率，Transwell小室实验检测各组PC9细胞迁移细胞数，葡萄糖检测试剂盒检测各组PC9细胞葡萄糖摄取量，三磷酸腺苷（ATP）检测试剂盒检测各组PC9细胞中ATP水平，乳酸检测试剂盒检测各组PC9细胞中乳酸水平，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组PC9细胞中己糖激酶2(HK2)和M2型丙酮酸激酶（PKM2） mRNA表达水平，Westernblotting法检测各组PC9细胞中HK2和PKM2蛋白表达水平。结果：MTT法，培养24、48和72 h时，与空白对照组比较，中和高剂量GAA组PC9细胞存活率明显降低（P<0.05）；培养72 h时，与低剂量GAA组比较，高剂量GAA组细胞存活率明显降低（P<0.05）。Transwell小室实验，与空白对照组比较，中和高剂量GAA组细胞迁移数明显减少（P<0.05）；与低剂量GAA组比较，高剂量GAA组细胞迁移数明显减少（P<0.05）。与空白对照组比较，中和高剂量GAA组PC9细胞中葡萄糖摄取量和乳酸水平均明显降低（P<0.05），高剂量GAA组PC9细胞中ATP水平明显降低（P<0.05）。RT-qPCR法，与空白对照组比较，中和高剂量GAA组PC9细胞中HK2和PKM2 mRNA表达水平均明显降低（P<0.05）。Western blotting法，与空白对照组比较，中和高剂量GAA组PC9细胞中HK2和PKM2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：中和高剂量GAA可抑制PC9细胞增殖及迁移的生物活性，降低糖酵解作用，其作用机制可能与抑制关键限速酶HK2和PKM2的表达有关。
关键词：灵芝酸A;;癌,非小细胞肺;;己糖激酶2;;M2型丙酮酸激酶;;糖酵解
基金资助：吉林省教育厅科学技术研究项目（JJKH20220069KJ,JJKH20180355KJ）;; 北华大学省级大学生创新创业训练计划项目（202310201135）
