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作者：陈琳;闫丽敏;邢槐杰;陈敏;黎晓艳;曾超胜;
单位：海南医学院第二附属医院神经内科;
摘要：目的：探讨血必净对抗N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体脑炎模型小鼠脑组织损伤及脑脊液（CSF）中辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T淋巴细胞（Treg）免疫失衡的影响，阐明其治疗作用。方法：60只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量血必净组和高剂量血必净组，每组15只。除对照组外，其余3组小鼠均给予抗原注射与免疫刺激结合法建立抗NMDA受体脑炎模型，低和高剂量血必净组小鼠分别给予腹腔注射5和10 mL·kg-1血必净注射液。采用HE染色观察各组小鼠脑组织病理形态表现，TUNEL法检测各组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组小鼠血清中白细胞介素（IL）-6、IL-10、IL-17和转化生长因子β(TGF-β)水平，流式细胞术检测各组小鼠CSF中Th17和Treg细胞百分率，Western blotting法检测各组小鼠脑组织中维甲酸相关核孤儿受体（RORγt）、叉头状转录因子3(Foxp3)、IL-10和IL-17蛋白表达水平，免疫组织化学染色法检测各组小鼠脑组织中IL-17和Foxp3阳性细胞率。结果：HE染色，对照组小鼠脑组织海马CA1区结构清晰，未见明显病变；与对照组比较，模型组小鼠脑组织海马CA1区部分锥体细胞呈三角形固缩浓染，顶树突拉长，少数神经细胞脱失，组织稀疏；与模型组比较，低和高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区细胞损伤减小，形态恢复正常，排列较为整齐，且高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区损伤的改善情况更明显。TUNEL法，与对照组比较，模型组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率明显升高（P<0.05）；与模型组比较，低和高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率明显降低（P<0.05）；与低剂量血必净组比较，高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率明显降低（P<0.05）。ELISA法，与对照组比较，模型组小鼠血清中IL-6和IL-17水平明显升高（P<0.05）,IL-10和TGF-β水平明显降低（P<0.05）；与模型组比较，低和高剂量血必净组小鼠血清中IL-6和IL-17水平明显降低（P<0.05）,IL-10和TGF-β水平明显升高（P<0.05）；与低剂量血必净组比较，高剂量血必净组小鼠血清中IL-6和IL-17水平明显降低（P<0.05）,IL-10和TGF-β水平明显升高（P<0.05）。流式细胞术，与对照组比较，模型组小鼠CSF中CD4+IL-17A+Th17细胞百分率明显升高（P<0.05）,CD25+Foxp3+Treg细胞百分率明显降低（P<0.05）；与模型组比较，低和高剂量血必净组小鼠CSF中CD4+IL-17A+Th17细胞百分率明显降低（P<0.05）,CD25+Foxp3+Treg细胞百分率明显升高（P<0.05）；与低剂量血必净组比较，高剂量血必净组小鼠CSF中CD4+IL-17A+Th17细胞百分率明显降低（P<0.05）,CD25+Foxp3+Treg细胞百分率明显升高（P<0.05）。Western blotting法，与对照组比较，模型组小鼠脑组织中RORγt和IL-17蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Foxp3和IL-10蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；与模型组比较，低和高剂量血必净组小鼠脑组织中RORγt及IL-17蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Foxp3和IL-10蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与低剂量血必净组比较，高剂量血必净组小鼠脑组织中RORγt和IL-17蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Foxp3和IL-10蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。免疫组织化学染色法，与对照组比较，模型组小鼠脑组织中IL-17阳性细胞率明显升高（P<0.05）,Foxp3阳性细胞率明显降低（P<0.05）；与模型组比较，低和高剂量血必净组小鼠脑组织中IL-17阳性细胞率明显降低（P<0.05）,Foxp3阳性细胞率明显升高（P<0.05）；与低剂量血必净组比较，高剂量血必净组小鼠脑组织中IL-17阳性细胞率明显降低（P<0.05）,Foxp3阳性细胞率明显升高（P<0.05）。结论：血必净能够有效改善抗NMDA受体脑炎小鼠脑组织损伤，调控细胞因子水平，干预抗NMDA受体脑炎小鼠Th17/Treg免疫失衡现象。
关键词：抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体脑炎;;血必净;;神经元凋亡;;辅助性T淋巴细胞17;;调节性T淋巴细胞;;免疫失衡
基金资助：海南省科技厅社会发展类重点研发项目（ZDYF2022SHFZ291）
