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作者：蒋晓涵;王雅宏;王晨;李佳璇;王富江;葛海涛;
单位：南京中医药大学药学院;江苏苏中药业研究院有限公司;
摘要：目的:通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术鉴别疮灵液的化学成分及结合动物实验探究疮灵液促进伤口愈合的作用机制。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS收集疮灵液的活性成分，通过网络药理学方法预测疮灵液促进伤口愈合的相关作用靶点，对相关靶点进行GO和KEGG信号通路富集分析。建立大鼠急性全层皮肤缺损模型，观察疮灵液对皮肤创面愈合情况的影响；HE和Masson染色观察皮肤病理情况；ELISA法测定血清中的白介素-1β(1L-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)及皮肤组织中羟脯氨酸(HYP)的含量；蛋白免疫印迹法检测大鼠创面组织中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、NF-κB、IL-1β蛋白的表达。结果:疮灵液中共包含67个化合物，网络药理学分析筛选出TP53、TNF、AKT1、EGFR、PIK3R1、IL-1β等34个核心靶点，参与炎症反应的PI3K/AKT、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)、T辅助细胞17(Th17)信号通路等159条通路，经分子对接验证活性成分杨梅素、大黄酚、大黄酸、槲皮素、金丝桃苷与TNF、AKT1、EGFR、IL-1β结合能力较好。动物实验结果表明，与正常对照组相比，模型对照组皮肤炎性细胞浸润明显增加，胶原纤维沉积减少，皮肤组织HYP含量显著降低(P<0.01),血清中IL-1β、TNF-α、TGF-β含量显著升高(P<0.01),VEGF含量显著降低(P<0.01),创面组织p-PI3K、p-AKT蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较，疮灵液各剂量组伤口愈合率明显提高，炎性细胞浸润明显减少，胶原纤维沉积明显增加，皮肤组织中HYP含量明显升高(P<0.05),疮灵液0.45、0.9 g/mL组血清中IL-1β、TNF-α含量显著降低(P<0.01),VEGF、TGF-β含量显著升高(P<0.01),皮肤创面组织p-PI3K、p-AKT蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),IL-1β蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:疮灵液通过调控PI3K-AKT/NF-κB通路抑制炎症反应，促进血管新生，从而促进伤口的愈合。
关键词：疮灵液;;超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术;;网络药理学;;创面愈合;;核因子-κB;;磷脂酰肌醇-3激酶;;蛋白激酶;;丝裂原活化蛋白激酶
基金资助：泰州市“凤城英才计划”青年科技人才托举工程(编号：TZ-018)
