来源：期刊VIP网 时间：
作者：田杰祥;王钢;宋敏;漆文霞;姜刚刚;李平顺;贺童;魏勇;安文博;
单位：甘肃中医药大学附属医院;甘肃中医药大学;
摘要：目的:基于网络药理学和实验验证探讨骨痨愈康丸含药血清干预类风湿关节炎骨破坏的作用机制。方法:利用中药系统药理学分析平台和中药分子机制的生物信息学分析工具筛选骨痨愈康丸组方中药活性成分及其相关靶点，筛选以类风湿关节炎骨破坏靶点的基因，构建“药物-成分-靶点-疾病”网络图。建立RAW 264.7诱导的破骨细胞模型，以骨痨愈康丸高中低剂量含药血清进行干预，CCK-8法检测RAW 264.7细胞增殖情况；ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、MMP-3、IL-1β的含量；Western blotting法检测细胞C-FOS、NFATC1、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα、p-IκBα蛋白的表达；免疫荧光染色检测NF-κB p65核移位。结果:通过网络药理学数据库和中药分子机制的生物信息学分析工具，得到骨痨愈康丸治疗类风湿关节炎骨破坏的潜在靶点47个，活性成分184种，主要有效成分为槲皮素、银杏叶酮、β-谷甾醇，关键靶点有炎性细胞因子TNF-α、IL-17,生物学过程涉及对细胞因子及骨破坏的反应，涉及的通路主要有NF-κB、PI3K/AKT等。细胞实验结果显示，与空白对照组相比，模型对照组细胞中TNF-α、MMP-3、IL-1β含量明显升高(P<0.05),C-FOS、NFATC1、NF-κB P65、p-NF-κB P65蛋白表达上调(P<0.05),p-IκBα蛋白表达下调(P<0.05),NF-κB P65在细胞核的表达上调(P<0.05);与模型对照组相比，不同剂量的骨痨愈康丸含药血清组细胞中TNF-α、MMP-3、IL-1β含量明显降低(P<0.05);0.95、1.90 g/kg骨痨愈康丸10%含药血清组细胞中的C-FOS、NFATC1、NF-κB P65、p-NF-κB P65蛋白表达下调(P<0.05),各浓度骨痨愈康丸含药血清组细胞中p-IκBα表达上调(P<0.05),NF-κB P65(红色)在细胞核的表达下调(P<0.05)。结论:骨痨愈康丸可抑制C-FOS、NFATC1、NF-κB P65和IκB的活化和磷酸化表达，减少炎性介质分泌，抑制NF-κB P65核移位，调控NF-κB的信号传导通路对类风湿关节炎骨破坏发挥保护作用。
关键词：骨痨愈康丸;;类风湿关节炎;;骨破坏;;网络药理学;;核因子κB信号通路
基金资助：国家自然科学基金地区基金资助项目(编号：81960832);; 甘肃省自然科学基金项目(编号：22JR5RA588)
