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作者：李丹阳;艾民;周派;李书楠;张傑屹;彭清华;
单位：湖南中医药大学;福建中医药大学;福建医科大学健康学院;湖南中医药大学附属第一医院;
摘要：目的:采用AlCl_3/D-gal联合给药的方法构建肾虚证阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)病证结合小鼠模型，并从造模因素、宏观表征、微观指征、以方测证4个方面对该模型进行评价。方法:60只KM小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地黄饮子17.55 g/kg组、黄连解毒汤5.2 g/kg组，每组各15只。除正常对照组外，其余各组均采用AlCl_3/D-gal联合给药的方法构建AD小鼠模型，持续14 w。从造模第11 w开始，各组灌胃相应药物，1次/d,持续4 w。观察小鼠一般状态、体质量、摄食、饮水、尿量、体征量化评分等评价肾虚证的宏观证候指标变化；HE染色和尼氏染色观察海马区神经元的病理变化；ELISA法检测海马组织Aβ_(1-42)、p-Tau及血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、皮质酮(CORT)含量；试剂盒检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力或含量；免疫荧光染色检测海马区星胶质细胞、小胶质细胞活化水平；Western blot法检测海马区突触后致密蛋白95 (PSD95)、突触素Ⅰ(Synapsin I)蛋白表达。结果:第14周时，与正常对照组相比较，模型对照组小鼠体质量下降，摄食、饮水量减少，尿量增加，体征量化评分升高，学习记忆能力减退，存在焦虑样行为，海马组织病理损伤明显，小胶质细胞及星胶质细胞活化数量增加，海马ACTH、CRH、CORT、MDA、Aβ_(1-42)、p-Tau含量升高，血清SOD、GSH-Px含量降低，海马Synapsin I、PSD95蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较，地黄饮子组小鼠体质量增加，尿量减少、体征量化评分降低，学习记忆能力改善、焦虑行为减轻，海马组织病理损伤缓解，小胶质细胞及星胶质细胞活化数量均减少，海马ACTH、CRH、CORT、MDA、Aβ_(1-42)、p-Tau含量降低，血清SOD、GSH-Px活力升高，海马Synapsin I、PSD95蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),黄连解毒组体征量化评分降低，海马星胶质细胞活化数量减少，MDA、ACTH、p-Tau含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论:采用AlCl_3/D-gal联合给药的方法可以成功构建肾虚证AD病证结合小鼠模型，能够初步为AD基础研究提供合理可靠的病证结合动物模型。
关键词：肾虚证;;阿尔茨海默病;;动物模型;;以方测证;;病证结合;;突触后致密蛋白95;;突触素Ⅰ
基金资助：湖南省中医药防治眼耳鼻喉疾病与视功能保护工程技术研究中心建设项目(编号：2018TP2008);; 湖南省中医药科研计划重点课题(编号：201901);; 湖南中医药大学国内一流建设学科项目(编号：湘教通[2018]469号);湖南中医药大学中医学一流学科开放基金项目(编号：2021ZYX31);; 湖南省卫生健康委科研课题(编号：202319018792);; 湖南省研究生科研创新项目(编号：CX20220775)
