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作者：陈雨珊;胡倩;向琳;晏嘉;刘加伟;李齐光;李林海;徐令清;
单位：广州中医药大学研究生院;广州医科大学附属清远医院(清远市人民医院)检验科;
摘要：目的 建立一种可视化环介导等温扩增(LAMP)方法，以快速检测肺炎克雷伯菌(KP),并对该方法的检测灵敏度和特异性进行评价。方法 针对KP的rcsA基因设计4条特异性LAMP引物，对反应条件(温度及时间)和反应体系中的名种参数进行优化，并使用嵌合型荧光染料SYBR GreenⅠ使反应可视化。通过染色可视化结果和琼脂糖凝胶电泳结果，确定最佳反应条件和反应体系。利用优化后条件和体系，以10倍梯度稀释DNA模板检测方法灵敏度，同时对肺炎克雷伯菌和其他数十种临床常见细菌及真菌进行检测以评价其特异性。结果 优化后确定最佳反应温度为63℃、反应时间为35 min,确定反应体系中缓冲液浓度为0.8×、镁离子浓度为8 mmol/L、dNTPs浓度为1.4 mmol/L、内外引物比为6∶1、Bst DNA聚合酶浓度为0.32 U/μl、甜菜碱浓度为0.75 mmol/L;灵敏度试验中，该方法可检测的模板浓度可达1.5 ng/μl;特异性试验中，仅肺炎克雷伯菌检测结果呈现阳性可视化结果及阳性电泳条带。结论 成功建立肺炎克雷伯菌可视化LAMP快速检测方法，且特异性高、灵敏度高、结果易于观察、无需精密仪器，临床检测初步应用成功后可适用于基层实验室检测。
关键词：肺炎克雷伯菌;;环介导等温扩增技术;;rcsA基因;;结果可视化;;快速检测
基金资助：广东省钟南山医学基金会科研资助基金(ZNSXS-20240010);; 广东省医学科学技术研究基金资助项目(A2021490);; 清远市科技计划项目(230913118723775);; 清远市人民医院医学科研基金资助项目(20190209、202301-201)
