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作者：向轩;孟文;陈俊锦;陈芳红;李海英;何学明;
单位：徐州医科大学研究生院;徐州医科大学附属连云港市立东方医院心血管内科;徐州医科大学附属连云港市立东方医院转化医学中心实验室;
摘要：目的 研究舒芬太尼(SUF)对脓毒症心肌损伤的保护作用及机制。方法 采用脂多糖(LPS)构建脓毒症心肌损伤体外实验模型，心肌H9C2细胞分成Control、LPS、SUF-L、SUF-M、SUF-H、SUF-H-ComC、SUF-H-ML385组，其中LPS、SUF-L、SUF-M、SUF-H、SUF-H-ComC、SUF-H-ML385组为实验组；实验组细胞分别在含有25 mg/L的LPS的细胞培养基中进行孵育，并分别在细胞培养基中添加终剂量为0、 5、 10、20、20、20μmol/L的SUF,其中SUF-H-ComC、SUF-H-ML385组细胞在细胞培养基中添加终剂量为10μmol/L的ComC和5μmol/L的ML385。Control组细胞在正常培养基中进行孵育。以含有等量培养基和CCK-8试剂，不包含心肌H9C2细胞为空白组。CCK-8法测定细胞存活率，检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平，铁离子比色法检测细胞中Fe~(2+)水平，酶联免疫吸附法测定细胞培养上清液中的白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，免疫印迹法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果 与Control组相比，LPS组细胞存活率降低，ROS、MDA、LDH、Fe~(2+)、IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高，SOD、GSH-Px水平降低，p-AMPK/AMPK、Nrf2、HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与LPS组相比，SUF-L组、SUF-M组、SUF-H组细胞存活率依次升高，ROS、MDA、LDH、Fe~(2+)、IL-1β、IL-6和TNF-α水平依次降低，SOD、GSH-Px水平依次升高，p-AMPK/AMPK、Nrf2、HO-1蛋白表达水平依次升高(P<0.05)。AMPK通路抑制剂和Nrf2通路抑制剂能够逆转SUF对LPS诱导的心肌H9C2细胞存活率和ROS、MDA、LDH、Fe~(2+)、SOD、GSH-Px、IL-1β、IL-6、 TNF-α水平以及下调p-AMPK/AMPK、Nrf2、HO-1的蛋白表达(P<0.05)。结论 SUF改善脓毒症心肌损伤，其作用机制可能通过激活AMPK/Nrf2/HO-1信号通路抑制铁死亡、氧化应激损伤及炎症反应有关。
关键词：舒芬太尼;;AMPK/Nrf2/HO-1通路;;氧化应激;;铁死亡;;脓毒症心肌损伤
基金资助：江苏省卫生健康委预防医学课题(Y12023027);; 连云港市卫生科技项目(202335)
