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作者：柴风雪;田占成;杨吉飞;张鸿歌;牛庆丽;独军政;关贵全;殷宏;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
摘要：乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）是由三带喙库蚊媒介传播的日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）感染引起的，临床表现以神经症状为主。NS1蛋白作为JEV编码的非结构蛋白，能够诱导机体产生非中和作用的保护性抗体，是JE诊断和疫苗研发的主要靶标。本研究以基因Ⅰ型JEV的NS1蛋白为靶标，将构建的重组质粒p ET30a-His-NS1转化Rosetta(DE3)表达菌，以0.5 mmol/L IPTG诱导表达。结果显示，与预期蛋白分子量大小一致的重组NS1蛋白以包涵体形式表达。经亲和层析柱纯化获得浓度为2.568 mg/mL的重组His-NS1蛋白。免疫印迹和间接免疫荧光结果表明，制备的高效价抗NS1蛋白多克隆抗体能够特异性识别蛋白分子量分别为46和55 ku的天然NS1蛋白。此外，本研究首次发现制备的抗NS1蛋白多克隆抗体与JEV预孵育能够剂量依赖性的显著降低JEV感染BHK-21细胞的病毒产量。将抗NS1蛋白多克隆抗体作为免疫沉淀抗体，用于JEV感染PK-15细胞的免疫沉淀质谱分析。结果表明，NS1蛋白能够与囊膜E蛋白相互作用。总之，本研究为深入了解NS1蛋白的生物学功能、JE诊断方法的建立和疫苗研制提供了基础材料。
关键词：日本脑炎病毒;;NS1蛋白;;多克隆抗体;;制备;;鉴定
基金资助：甘肃省自然科学基金项目（22JR5RA029）;; 国家肉牛牦牛产业技术体系专项（CARS-37）;; 甘肃省基础研究创新群体项目（22JR5RA024）;; 中国农业科学院科技创新工程项目（CAAS-ASTIP-2016-LVRI）
