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作者：张蕾;陈亮;冯万宇;苗艳;兰世捷;吴宪;沈思思;张艳;田秋丰;杨昊天;姚美玲;南景东;江波涛;史同瑞;黄宣凯;
单位：黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院;
摘要：为建立灵敏且特异的多杀性巴氏杆菌（P.multocida）快速、可视化临床诊断方法，本试验基于重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）和侧流免疫层析试纸条（LFD）技术，以多杀性巴氏杆菌种属特异性KmtⅠ基因为模板，设计了用于RPA扩增和nfo RPA扩增的特异性引物、探针，通过琼脂糖凝胶电泳和免疫层吸试纸条分析，筛选最佳引物，优化RPA反应体系并确定最佳反应条件。结果显示，该方法在30℃、20 min内即可获得最佳检测效果，对质粒浓度的最低检测限为2.26×101copies/μL，且与大肠杆菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和鼠伤寒沙门菌无交叉反应；使用RPA basic、RPA-LFD以及普通PCR同时对15份籽鹅临床样品进行检测，结果一致，阳性检出率均为100%，符合率为100%。综上所述，本试验成功建立了多杀性巴氏杆菌的RPA basic与RPA-LFD快速检测方法，具有较高的灵敏度和特异性，操作简单，对仪器、场地要求低，为多杀性巴氏杆菌病的即时诊断和流行病学调查提供了可靠技术支持。
关键词：多杀性巴氏杆菌;;重组酶聚合酶;;侧流免疫层析试纸条;;快速检测
基金资助：黑龙江省省属科研院所科研业务经费项目（CZKYF2024-1-C016）;; 黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院自拟课题（ZNKT-202212）;; 黑龙江省农业科技创新跨越工程项目（CX23TS21）;; 齐齐哈尔市科技计划创新激励项目（CNYGG-2023019）
