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作者：赵东旭;蔡梦雷;苏士炫;刘逸洋;闫雪敏;张政钢;薛晓阳;闫金坤;崔国林;
单位：河北工程大学生命科学与食品工程学院;华裕农业科技有限公司;
摘要：建立一种基于肠炎沙门菌鞭毛蛋白Fli C的间接ELISA方法。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达肠炎沙门菌Fli C截短蛋白，将其作为包被抗原建立间接ELISA方法；采用52份临床阴性鸡血清测定该方法的阴阳性阈值，采用沙门菌阳性鸡血清测定该方法的特异性、敏感性和重复性，采用135份临床血清样品测定该方法与BioChek公司禽沙门菌D群ELISA试剂盒检测结果的符合性和临床适用性。结果显示：截短表达的Fli C蛋白在BL21(DE3)中呈可溶性表达，可与H:g抗体特异性结合，与H:i和H:m抗体不反应；基于截短表达的Fli C蛋白的间接ELISA方法包被抗原最优质量浓度为4 ng/μL、待检血清最优稀释度为1∶40、HRP标记的第二抗体的最优稀释度为1∶2 000；该方法的阴性阈值为0.82，阳性阈值为0.94，可检出80倍稀释的肠炎沙门菌阳性血清抗体，未检出鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌、姆班达卡沙门菌、汤姆森沙门菌和肯塔基沙门菌阳性血清抗体，批间和批内重复检测变异系数分别为0.43%～5.13%和0.50%～2.68%，与禽沙门菌D群ELISA试剂盒的检测符合率为94.1%。本研究通过原核表达获得FliC截短蛋白，并基于该蛋白成功建立了一种检测肠炎沙门菌抗体的间接ELISA检测方法。
关键词：肠炎沙门菌;;Fli C;;原核表达;;间接ELISA
基金资助：河北省创新能力提升计划项目（235A6601D）;; 中央引导地方科技发展资金项目（216Z6602G）;; 国家现代农业产业技术体系项目（CARS-40）
