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作者:赵谜;徐飞飞;郑丹阳;赵治钤;程瑞;熊超;王军;穆杨;
单位:西北农林科技大学动物医学院;凯鸽融汇生物科技(西安)有限公司;
摘要:以鸽圆环病毒(Pi CV) Rep基因高度保守区为靶标设计环介导等温扩增(LAMP)引物,以甲酚红为指示剂,经条件优化和特异性、敏感性评价等,建立了Pi CV的可视化LAMP检测方法,并采用建立的Pi CV可视化LAMP方法和常规PCR方法分别对35份鸽临床样品进行Pi CV检测并对检测结果进行对比。采用建立的方法在64℃反应60 min后再85℃作用10 min,即可通过目测反应液颜色变化判定检测结果。阳性反应管的反应液由紫红色变为橙色,阴性管反应液颜色不变。采用建立的方法检测鸽腺病毒、鸽疱疹病毒、鸽痘病毒和鸽Ⅰ型副黏病毒等均未出现交叉反应;该方法的最低检测限为17.4 copies/μL重组质粒,表明该方法的灵敏度是常规PCR方法的100倍。采用建立的方法检出Pi CV阳性样品16份,常规PCR方法检出阳性样品15份,说明本研究中建立的Pi CV可视化LAMP方法可应用于临床检测,为方便快捷地诊断鸽圆环病毒病提供了技术支持。
关键词:鸽圆环病毒;;可视化;;环介导等温扩增;;甲酚红;;建立
基金资助:凯鸽融汇生物科技(西安)有限公司横向课题(TG20240007)