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中国兽医科学2025年第01期:猪细小病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立与应用

来源:期刊VIP网 时间:


作者:帅文娜;郭子强;李佳乐;罗梦;李丽薇;周艳君;姜一峰;童武;童光志;李兆龙;高飞;

单位:中国农业科学院上海兽医研究所;广西大学动物科学技术学院;扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;福建省农业科学院畜牧兽医研究所;上海市兽医生物技术重点实验室;

摘要:本研究通过对猪细小病毒(PPV)1型非结构蛋白NS1基因保守序列进行设计,建立了PPV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,实现了对PPV1的快速检测。结果显示,该检测方法的Ct值与标准品质粒在1.0×10~(10)copies/μL~1.0×10~4copies/μL范围内具有良好的线性关系,曲线回归方程为y=-3.618 6x+42.01,R2=0.99,扩增效率为189%;重复性好,组内与组间变异系数均低于1.0898%;敏感性好,最低检测限为1.0×10~1copies/μL;特异性强,不与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、非洲猪瘟病毒发生交叉反应,并用该方法对临床样品与病毒拷贝数进行了检测。表明本研究建立的方法重复性好、敏感性高、特异性强,适用于对PPV进行临床检测与诊断。

关键词:猪细小病毒;;NS1蛋白;;TaqMan实时荧光定量PCR

基金资助:国家重点研发计划资助项目(2022YFD1800800,2021YFD1801401);; 上海市自然科学基金资助项目(21ZR1476-900);; 国家自然科学基金资助项目(32373050,32072861);; 中国农业科学院科技创新工程资助项目(CAASCS-LPDCP-202402);; 上海市兽医生物技术重点实验室开放基金资助项目(BD1500010)