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作者：樊月圆;王瑾艺;刘亚波;茶金龙;白卫兵;四朗玉珍;富国文;
单位：云南农业大学动物医学院;云南农业职业技术学院;西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所;
摘要：本研究旨在基于环介导等温扩增（LAMP）技术建立一种快速诊断羊源产气荚膜梭菌的可视化快速检测方法。首先以产气荚膜梭菌cpa基因为靶基因，构建重组质粒；建立LAMP检测技术并对各反应条件进行优化，随后开展敏感性、特异性、重复性试验，扩增产物可视化及临床样品检测。结果显示，本研究成功建立了羊源产气荚膜梭菌的LAMP检测方法，筛选出最适温度、Mg~(2+)浓度、Bst DNA聚合酶和dNTPs添加量以及内外引物最佳浓度比。并通过浊度法或添加HNB、SYBR GreenⅠ、钙黄绿素染料显色，实现可视化。使用该方法对6种常见肠道菌进行检测，仅对产气荚膜梭菌具有良好的特异性；以DNA为模板时，其灵敏度与荧光定量PCR法相近，是普通PCR的100倍；以菌液为模板时，其灵敏度比普通PCR法高出1～2个数量级，兼具便捷快速的特点。结果表明，本研究成功建立了羊源产气荚膜梭菌LAMP法，该方法可用于临床样品的快速检测。
关键词：产气荚膜梭菌;;环介导等温扩增技术;;可视化检测
基金资助：西藏自治区十四五重大专项（XZ202101ZD0001N）
