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作者：党海迷;杨洋;茹毅;郝荣增;蒋成辉;赵陇和;卢炳州;李亚军;胡馨予;韩盛楠;伍国强;郑海学;
单位：兰州理工大学生命科学与工程学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;
摘要：本研究旨在利用昆虫杆状病毒表达系统制备非洲猪瘟病毒（ASFV） p15蛋白，并对其免疫原性进行评价，为非洲猪瘟亚单位疫苗研究提供试验基础。首先把编码p15蛋白的基因克隆至载体pFastBac1中，构建重组质粒p Fast Bac-p15，将该质粒与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒r Bac-p15，将r Bac-p15感染sf9细胞进行重组蛋白的表达；然后利用亲和层析纯化获得目的蛋白，并利用SDS-PAGE、Western-blot和IFA鉴定重组蛋白的表达及反应性；再将p15蛋白免疫小鼠，评估其体液和细胞免疫应答水平。结果表明，在感染重组杆状病毒r Bac-p15的sf9细胞中，p15蛋白获得高效表达，并可被ASFV康复猪血清特异性识别。p15蛋白免疫小鼠诱导产生高水平的特异性抗体和细胞因子，有利于刺激脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞的增殖。综上，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功制备了p15蛋白，该蛋白能够同时诱导很好的体液和细胞免疫应答，有助于非洲猪瘟疫苗的进一步研究。
关键词：非洲猪瘟病毒;;p15蛋白;;昆虫杆状病毒表达系统;;免疫原性评价
基金资助：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（CAAS-ZDRW202409）;; 国家生猪产业技术体系项目（CARS-35）;; 中央高校基本科研业务费专项（lzujbky-2022-ct02）;; 甘肃省自然科学基金重点项目（23YFNA0011）;; 甘肃省科技重大专项（23ZDK A0002）;; 兰州市青年科技人才创新项目（2023-QN-3）
