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作者：靳家鑫;杨蕊;张泽;时文健;张广智;丁家波;鑫婷;
单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(北方)农业农村部兽用生物制品与化学药品重点实验室;福建农林大学动物科学学院;
摘要：制备针对牛C-反应蛋白（CRP）的单克隆抗体，建立牛CRP双抗体夹心ELISA定量检测方法，为牛细胞因子检测以及感染的快速诊断提供有力工具。利用原核表达系统和293F真核表达系统表达牛CRP，采用亲和层析纯化重组蛋白，免疫小鼠后利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对牛CRP的单抗，以棋盘法筛选抗体对并建立夹心ELISA方法，以临床样品验证该方法的可行性。SDS-PAGE结果显示成功纯化到CRP，经3轮亚克隆成功获得5株针对牛CRP的单抗细胞株，其中3H4和2G4-HRP抗体对的检测效果最佳。临床样品检测显示结核菌感染早期的牛血清中CRP质量浓度显著高于健康牛，结果说明制备的牛CRP单抗对可以识别天然牛CRP。检测结核排菌期和非排菌期的牛血浆样品，发现排菌期的结核病牛CRP质量浓度显著高于非排菌期的结核病牛。结果表明，建立的牛CRP夹心ELISA检测方法可用于牛结核病的诊断，为分析牛免疫感染状态及诊断牛感染性疾病奠定了基础。
关键词：C-反应蛋白;;单克隆抗体;;ELISA;;牛结核病
基金资助：北京市自然科学基金项目（6164039）;; 宁夏回族自治区重点研发计划项目（2024BBF02014）;; 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（2022-YWF-ZYSQ-01）
