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作者:张石豪;朱真;焦文杰;王诗研;韩凤烨;孙茜;邹兴启;印春生;赵传芳;
单位:中国农业科学院特产研究所;中国兽医药品监察所;
摘要:旨在表达小反刍兽疫病毒H蛋白,预测并鉴定其线性B细胞抗原表位。采用PCR扩增小反刍兽疫病毒H基因,构建重组质粒pET-30a (+)-H,经原核表达系统表达后纯化并复性H蛋白,用复性的H蛋白免疫小鼠制备多抗血清。利用生物信息学软件预测并分析H蛋白线性B细胞表位,将预测的其中16个潜在表位核苷酸序列分别重组至pGEX-4T-1载体,通过原核表达载体系统实现了预测表位与GST标签蛋白的融合表达,并使用制备的多抗血清通过Western-blot和间接ELISA方法对纯化后的预测表位融合蛋白进行鉴定。结果表明,H蛋白具有良好的免疫原性,用重组H蛋白多抗筛选并鉴定出5个线性B细胞表位。本研究成功表达了小反刍兽疫病毒H蛋白,预测并鉴定出5个线性B细胞表位,为小反刍兽疫诊断试剂及表位疫苗的研发提供了参考。
关键词:小反刍兽疫病毒;;H蛋白;;原核表达;;线性B细胞表位
基金资助:国家重点研发计划项目(2022YFD1800703);; 吉林省科技厅创新平台(基地)和人才专项(20230508009RC)