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作者：马雪青;张雨星;李平花;王松泰;魏达礼;赵志荀;朵红;卢曾军;孙普;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;甘肃农业大学动物医学院;兰州市动物卫生监督所;青海大学畜牧兽医科学院;
摘要：为建立一种灵敏、特异、准确的羊肠道病毒（CEV）实时荧光定量RT-PCR检测方法，本研究基于CEV基因序列的保守区设计特异性引物和探针，并制备标准品，通过优化反应体系和反应条件，建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法，同时对其敏感性、特异性和重复性进行评估，并与常规RT-PCR比较检测临床样品。结果显示，所建方法的标准曲线R2为0.995，拷贝数与Ct值有良好的线性关系；该方法特异性强，与口蹄疫病毒（FMDV）、小反刍兽疫病毒（PPRV）、羊痘病毒（SPV）、羊口疮病毒（ORFV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）无交叉反应；敏感性最低检测限为23 copies/μL；组内与组间变异系数均小于2.5%，重复性好。使用本方法检测了598份羊的临床样品，阳性检出率（83/598）高于常规RT-PCR (30/598)。上述结果表明，本研究建立了一种灵敏、特异的CEV TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法，并建议采用羊的粪便或肛拭子即可进行CEV的流调工作，这为CEV的诊断、流行病学调查提供了重要的技术支持。
关键词：羊肠道病毒;;TaqMan实时荧光定量RT-PCR;;诊断
基金资助：兰州市科技计划项目（2022-2-46）;; 重点研发与转化计划科技援青合作专项（2022-QY-207）
