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作者：郝陆瑶;刘泓佑;马园;马成宇;李政忆;王瑞;王伟国;
单位：内蒙古农业大学兽医学院,农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室/国家级动物医学实验教学中心;呼伦贝尔市农牧科学研究所;
摘要：本研究旨在优化厚垣普可尼亚菌（Pochoniachlam ydosporia）原生质体的制备与再生体系，为基因转化、遗传改造及生物学功能研究奠定基础。通过正交试验，本研究系统评估了酶组合、稳渗剂、酶浓度和酶解时间等因素，优化了原生质体的制备与再生条件。结果表明，酶组合为纤维素酶+蜗牛酶+溶壁酶，酶浓度1.5%，稳渗剂为KCl，酶解时间为4 h，原生质体产量达到每毫升3.95×106个；最佳再生条件为纤维素酶+溶壁酶组合、酶浓度2%、山梨醇和酶解时间1 h，再生率达14.63%。通过CFDA-SE荧光探针结合激光共聚焦显微镜观察，确认原生质体活性良好。为验证再生菌株的生物学功能稳定性，进一步通过侵染试验评估了其对3种动物胃肠道蠕虫卵的侵染能力。结果表明，再生菌株的侵染能力与普通菌丝无显著差异，表明制备与再生过程未影响其生物学功能。本研究成功建立了P.chlam ydosporia原生质体制备与再生体系，为深入探索其侵染虫卵的分子机制提供了重要依据。
关键词：卵寄生性真菌;;原生质体制备;;原生质体再生;;生物防治
基金资助：内蒙古自治区重点研发和成果转化计划项目（2023YFDZ0048）;; 国家自然科学基金项目（32160838）;; 国家乳业技术创新中心项目（2023-JSGG-5）;; 鄂尔多斯市国家可持续发展议程创新示范区建设（含厅市会商、科技突围工程）科技支撑项目（KCX2024016）;; 内蒙古自然科学基金项目（2023LHMS03022,2023LHMS03005,2021MS03088）
