来源：期刊VIP网 时间：
作者：钟华;刘金凤;陈冰;覃绍敏;陈凤莲;马玲;林俊;毛燕;秦树英;白安斌;
单位：广西民族大学海洋与生物技术学院;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室;
摘要：探讨通过凋亡抑制剂阻断PRRSV诱导的细胞凋亡来促进PRRSV体外复制，从而提高PRRSV体外培养滴度的可行性。本研究以PRRSV高致病毒株(HP-PRRSV)感染Marc-145细胞，并用三种凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK、Z-IETD-FMK、Z-LEHD-FMK)分别处理PRRSV感染细胞，通过比较在不同的浓度、不同的作用时间处理下PRRSV培养滴度(TCID_(50))来筛选最佳抑制剂及其最佳使用浓度和作用时间。同时采用caspase-8活性蛋白酶检测试剂盒、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、流式细胞术等检测在最佳抑制剂作用下caspase-8活性、细胞凋亡及其通路相关因子表达情况。结果显示：z-IETD-FMK(caspases-8特异性抑制剂)为最佳抑制剂，10 μmol/L为最佳使用浓度，PRRSV感染细胞48 h后加入10 μmol/L Z-IETD-FMK能最大限度提高PRRSV体外培养滴度。此外，PRRSV感染Marc-145细胞后，细胞caspase-8活性显著增加，且随着感染时间的延长，细胞凋亡率及促凋亡因子Bax均呈上升趋势，而抑凋亡因子Bcl-2表达水平却呈下降趋势；用抑制剂z-IETD-FMK处理后，细胞caspases-8活性下调，细胞凋亡率也下降，Bax表达量显著低于不加抑制处理的病毒感染组(P<0.01)，与此相反Bcl-2的表达水平为升高趋势，显著高于不加抑制处理的病毒感染组(P<0.01)。说明，caspase-8特异性抑制剂能有效抑制PRRSV诱导的细胞凋亡。结果提示HP-PRRSV感染可通过caspase-8途径诱导Marc-145细胞凋亡，从而抑制病毒的复制。使用caspase-8特异性抑制剂可有效抑制细胞凋亡，进而提高病毒体外培养滴度。
关键词：HP-PRRSV;;caspase;;细胞凋亡;;活性检测
基金资助：广西生物技术兽医生物技术重点实验室开发项目(19-50-40-B-03);; 国家现代农业产业技术体系广西创新团队生猪产业功能专家岗位项目(nycytxgxcxtd--15-01)
