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作者：杨雪;任善会;王相伟;龚真莉;殷相平;孙跃峰;陈豪泰;万学瑞;
单位：甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所;
摘要：羊睾丸原代细胞的体外培养是探究牛羊病毒致病机理的重要材料，实际科研工作中常受困于此类细胞传代性差、性质不稳定等缺点。外源性导入人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)可以促使端粒酶活性的表达，延长细胞体外培养寿命是一种有效建立细胞永生化的方法。本试验中，通过RT-PCR获得hTERT。利用同源重组的技术，成功的构建了hTERT的真核表达质粒和慢病毒质粒。利用慢病毒表达系统，建立了稳转hTERT绵羊的睾丸细胞系。间接免疫荧光和蛋白免疫印迹试验研究结果均显示，hTERT基因已成功整合进入绵羊睾丸基因组中并稳定表达。第30代次的羊睾丸细胞生长较快，性状较稳定，表明已成功构建了具有永生化特性的绵羊睾丸细胞系，为草食动物病毒的相关研究提供重要的细胞模型。
关键词：绵羊;;睾丸原代细胞;;人端粒酶逆转录酶基因;;hTERT;;永生化细胞系
基金资助：甘肃农业大学兽医学省级特色学科开放课题(GSAU-XKJS-2018-071);; 中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费(1610312021008)
