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作者：刘影;闫若潜;王东方;杨海波;赵美雪;宋丹;赵雪丽;谢彩华;王淑娟;马震原;柴茂;王翠;刘梅芬;
单位：河南省动物疫病预防控制中心河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室;
摘要：建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法，用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对，经优化反应体系、反应程序等反应条件，建立一种基于探针技术的FQ-PCR方法，验证方法的敏感性、特异性和重复性，对130份临床样品进行检测，并与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)进行比较分析。本研究成功建立的ASFV和HP-PRRSV二重FQ-PCR检测方法在10~(-1)～10~5 copies/μL模板范围内有良好的线性关系；对ASFV和HP-PRRSV基因出现阳性扩增，但对猪日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲经典株(VR2332株)、健康猪脾脏等7种病原核酸样品对照未出现扩增；批内、批间试验变异系数在0.53%～3.14%，重复性良好；对ASFV和HP-PRRSV的最低检测模板浓度均为10 copies/μL；利用建立的二重FQ-PCR方法对130份临床样品进行检测，检测结果与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和HP-PRRSV二重FQ-PCR检测方法，为ASFV和HP-PRRSV的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。
关键词：非洲猪瘟病毒;;高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒;;二重FQ-PCR
基金资助：河南省科技创新领军人才(04200510012);; 河南省现代农业产业技术体系课题(豫财科[2020]92号)
