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作者：安瑞;侯冠欣;孙欣艺;郭福强;刘小琛;段文龙;史秋梅;吴同垒;张志强;
单位：河北科技师范学院动物科技学院河北省预防兽医重点实验室;
摘要：为了建立一种特异性强、敏感性高、成本相对较低的牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)检测方法，试验基于临床分离株BPIV3 HB-1具有高保守性的HN基因序列设计特异性检测引物，在PCR扩增体系中添加纳米金颗粒(25 nmol/L),对纳米金颗粒粒径与剂量、退火温度、引物体积进行优化，建立了BPIV3 Nano-PCR检测方法，对该方法进行特异性和敏感性检测，并采用该方法对58份临床牛鼻腔拭子样本进行检测。结果表明：当10 nm的纳米金颗粒(25 nmol/L)剂量为0.8μL、退火温度为56℃、引物体积为2μL时，扩增效果最佳；采用该方法对可引发牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease complex, BRDC)的5种病毒病原体[BPIV3、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(Bovine respiratory syncytial virus, BRSV)、牛传染性鼻气管炎病毒(Bovine infectious rhinotracheitis virus, IBRV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus, BCoV)]进行检测，仅BPIV3呈阳性，其他病毒均呈阴性；该方法能检测到的质粒最低拷贝浓度为2.1×10~2 copies/μL,敏感性是普通PCR检测方法的100倍；该方法临床样本检测结果与实时荧光定量PCR检测方法检测结果的符合率为100%。说明本研究建立的BPIV3 Nano-PCR检测方法特异性强、敏感性高，可用于BPIV3感染初期的快速检测。
关键词：牛副流感病毒3型;;HN基因;;牛呼吸道疾病综合征;;Nano-PCR;;检测方法
基金资助：中央引导地方科技发展资金项目(236Z6604G);; 河北省现代农业产业体系肉牛产业创新团队疫病防控与减抗岗位项目(HBCT2024240201);; 河北省高层次人才资助项目(C20231014);; 河北科技师范学院高校基本科研任务业务费专项(2023JK14);; 承德国家可持续发展议程创新示范区建设科技专项(202302F040)
