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作者：代爽;秦达;吴书音;王延涛;李国军;汪登奎;戴秀秀;余丽芸;侯喜林;
单位：黑龙江八一农垦大学动物科技学院;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;上海迈邦生物科技有限公司;
摘要：为了利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞稳定表达再生胰岛衍生蛋白3a(regenerating islet-derived protein 3a, Reg3a),并获得具有抑菌活性的抑菌蛋白，试验先通过PCR扩增Reg3a基因，构建真核表达载体pcDNA3.1-Reg3a-EGFP后转染至对数生长期CHO细胞内，通过遗传霉素(G418)筛选阳性细胞，并采用有限稀释法进行单克隆细胞株筛选；随后利用Western-blot对细胞表达产物进行鉴定；最后使用纯化后的蛋白进一步进行抑菌活性试验。结果表明：重核真核表达载体pcDNA3.1-Reg3a-EGFP构建成功，连续传代20次仍正常表达。Western-blot鉴定显示在17.64 ku处有Reg3a特异性条带。纯化的Reg3a蛋白(0.8 mg/mL)可明显抑制产肠毒素性大肠杆菌C83912(ETEC-K99)、产肠毒素性大肠杆菌C83902(ETEC-K88)、产肠毒素性大肠杆菌C83916(ETEC-987p)及金黄色葡萄球菌，且对金黄色葡萄球菌的抑制效果更好。说明稳定表达Reg3a的CHO细胞株构建成功，且表达的Reg3a具有抑菌活性。
关键词：Reg3a;;CHO细胞;;真核表达;;抑菌活性;;大肠杆菌;;金黄色葡萄球菌
基金资助：黑龙江八一农垦大学“三纵”科研团队(自然)项目“动物肠道菌群与免疫学研究创新团队”(TDJH201904)
