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作者：刘艺;王慧荣;刘文俊;杨丽华;董春光;韩文儒;武守艳;
单位：山西农业大学;
摘要：为了建立一种方便快速、特异性强、灵敏度高的牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)的检测方法，试验以BVDV 5′UTR基因高度保守区为靶标，设计特异性引物，对反应时间、温度及引物浓度进行优化，建立了BVDV的逆转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)检测方法，对该方法进行特异性、灵敏度及重复性检测，并采用该方法检测102份牛肛拭子样本的阳性率，分析与市售BVDV RT-PCR试剂盒的符合率。结果表明：该方法在37.5℃恒温反应15 min后通过琼脂糖凝胶电泳即可完成对病毒核酸的检测；与牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus, IBRV)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)、牛冠状病毒(Bovine corona virus, BCoV)、大肠杆菌、巴氏杆菌无交叉反应，特异性良好；最低检出限为3.0×10~2 copies/μL;组间和组内重复性均良好；检测102份牛肛拭子样本的阳性率为10.8%,与市售BVDV RT-PCR试剂盒的符合率为99.0%。说明试验成功建立了特异性强、灵敏度高、重复性好的BVDV RT-RPA检测方法，该方法可用于临床样本的快速检测。
关键词：牛病毒性腹泻病毒;;牛病毒性腹泻;;逆转录重组酶聚合酶扩增;;检测方法;;快速检测
基金资助：山西省科技攻关项目(20150311017-3);; 山西省重点研发计划项目(201903D211012);; 山西省农业科学院农业科技创新研究课题(YCX2020104;YCX2020105);山西省农业科学院农业科技创新工程项目(YGC2019TD01)
