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作者：王帅;武力;
单位：华南农业大学兽医学院;广东华农高科生物药业有限公司;
摘要：为了探讨CpG重组质粒对猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)刺激效果及体外抗PRRSV效果，试验对大量提取的CpG49重组质粒进行了酶切鉴定，采用CCK-8法及实时荧光定量PCR方法检测了CpG49重组质粒对猪PBMC在第24,48,72小时的免疫刺激效果及α干扰素(IFN-α)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-12(IL-12)的转录水平，最后通过终点稀释法、实时荧光定量PCR、间接免疫荧光法和Western-blot方法评估CpG49重组质粒孵育猪PBMC细胞48 h后收获的上清液对PRRSV体外的抗病毒作用。结果表明：CpG49重组质粒在4 397 bp处出现单酶切条带，在2 492 bp和1 905 bp处出现双酶切条带。不同质量浓度CpG49重组质粒均对猪PBMC有一定刺激效果，但10μg/mL CpG49重组质粒在第48小时对猪PBMC细胞的刺激效果最佳。与阴性对照相比，10μg/mL CpG49重组质粒亦能够在作用24 h后极显著提升猪PBMC的IL-1β、IL-6、IL-10和IL-12细胞因子的mRNA相对表达量(P<0.01或P<0.000 1),作用持续时间可达48 h。与病毒对照组相比，用10μg/mL CpG49重组质粒孵育猪PBMC细胞上清液能够极显著降低子代病毒滴度、PRRSV ORF7 mRNA相对表达量及PRRSV N蛋白相对表达量(P<0.000 1)。说明CpG49重组质粒能够刺激猪PBMC免疫应答且具有体外抗PRRSV效果。
关键词：CpG重组质粒;;PRRSV;;免疫刺激;;抗病毒;;猪外周血单个核细胞;;细胞因子;;Toll样受体9
基金资助：广州市科技计划-民生科技项目(202002020056);; 广州市科技项目(2023B03J1311)
