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作者：赵永;张游宇;顾丽菊;王春源;马金帅;张依裕;
单位：贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州大学香猪研究所;贵州省畜禽遗传资源管理站;贵州优农谷生态产业有限公司;
摘要：12型α1链胶原蛋白（COL12A1）是I型胶原蛋白纤维的辅助胶原，主要参与细胞外基质（ECM）的组装和细胞-基质的相互作用。为探索干扰COL12A1基因对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响，试验通过构建猪COL12A1基因shRNA干扰载体，转染猪乳腺上皮细胞，TMT定量蛋白组学筛选差异表达蛋白，Annexin V/PI、CCK-8和流式细胞术检测细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡。结果显示，干扰组（shRNACOL12A1-1784,1784表示COL12A1 mRNA参考序列上的靶向起始碱基位置）与对照组相比，共筛选到差异表达蛋白1 742个，其中上调蛋白831个，下调蛋白911个。GO富集发现，差异表达蛋白主要富集在细胞外区域、核糖体、胞外区部分。KEGG通路富集发现，差异表达蛋白主要富集在核糖体、缺氧诱导因子-1、铁死亡信号通路。COL12A1基因沉默后，48 h和72 h时干扰组细胞在450 nm处的OD值极显著低于对照组，提示细胞增殖能力明显下降；干扰组G1期细胞占比均极显著高于对照组，干扰组G2期和S期细胞百分比显著低于对照组；干扰组细胞凋亡率极显著高于对照组。说明干扰COL12A1基因可抑制细胞增殖和增加细胞凋亡，诱导细胞周期G1/S期阻滞，并受多个信号通路调控。
关键词：COL12A1;;猪乳腺上皮细胞;;蛋白组学;;细胞增殖;;细胞凋亡
基金资助：贵州省2025年生猪产业科技创新项目“生猪高效养殖关键技术研究与推广”(202505);; 贵州省生猪产业技术体系健康养殖功能实验室和遵义综合实验站建设项目(GZSZCYJS TX-03、GZSZCYJSTX-07);; 国家重点研发计划子课题(2022YFD1100308-01)联合资助
