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作者：李群;刘寻;朱紫冰;周婷婷;肖艳波;谭劲;
单位：湖南中医药大学第一附属医院;
摘要：目的:探讨加味丹玄口康调节Yes相关蛋白(YAP)/具有PDZ结合基序的转录辅激活因子(TAZ)信号通路对槟榔碱诱导的口腔黏膜下纤维化的体内外模型的影响及作用机制。方法:取SD大鼠建立口腔黏膜下纤维化(OSF)模型，随机分为模型对照组、加味丹玄口康6、12 g/kg组、YAP抑制剂维替泊芬10 mg/kg组，每组12只，另取12只大鼠作为正常对照组，分组干预4 w后检测大鼠张口度变化；HE、Masson染色观察口腔颊黏膜组织病理变化，检测上皮钉突长度及胶原容积分数；Western blot、qRT-PCR法检测口腔颊黏膜组织上皮及纤维化蛋白E-cadherin、CollagenⅠ、Vimentin及YAP/TAZ通路蛋白及mRNA表达；ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、转化生长因子(TGF)-β1含量。将30只SD大鼠随机均分为正常对照组和加味丹玄口康12 g/kg组，制备含药血清。体外培养HaCaT细胞，采用CCK-8法考察槟榔碱、加味丹玄口康含药血清、维替泊芬对HaCaT细胞存活率的影响；将细胞设为空白对照组、模型对照组、24 g/kg加味丹玄口康10%含药血清组和YAP抑制剂维替泊芬组；Western blot、qRT-PCR法检测细胞中E-cadherin、CollagenⅠ、Vimentin及YAP/TAZ通路相关蛋白及mRNA表达；ELISA检测细胞中TNF-α、IL-1β、TGF-β1含量。结果:动物实验中，与假手术对照组比较，模型对照组大鼠张口度显著降低，上皮萎缩，炎性细胞浸润，胶原纤维沉积增多，病理损伤严重，血清TNF-α、IL-1β、TGF-β1含量显著增加，口腔颊黏膜组织CollagenⅠ、Vimentin、YAP、TAZ蛋白及mRNA表达均显著上调，E-cadherin蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较，加味丹玄口康各组、YAP抑制剂维替泊芬组大鼠张口度显著增大，上皮增厚，炎性细胞减少，胶原纤维减少，病理损伤显著改善，血清TNF-α、IL-1β、TGF-β1含量明显降低及口腔颊黏膜组织CollagenⅠ、Vimentin、YAP、TAZ蛋白及mRNA表达明显下调，E-cadherin蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。细胞实验中，依据CCK-8结果，选择75μg/mL槟榔碱浓度、24 g/kg加味丹玄口康10%血清浓度、200 nmol/L维替泊芬作为试验浓度；与空白对照组比较，模型对照组细胞TNF-α、IL-1β、TGF-β1含量显著升高，CollagenⅠ、Vimentin、YAP、TAZ蛋白及mRNA表达均明显上调，E-cadherin蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较，12 g/kg加味丹玄口康10%含药血清组、维替泊芬200 nmol/L组TNF-α、IL-1β、TGF-β1含量显著降低，CollagenⅠ、Vimentin、YAP、TAZ蛋白及mRNA表达明显下调，E-cadherin蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:加味丹玄口康可通过下调YAP/TAZ信号通路表达而抑制体内外口腔黏膜细胞炎症反应，进而减轻口腔黏膜下纤维化。
关键词：加味丹玄口康;;口腔黏膜下纤维化;;Yes相关蛋白/具有PDZ结合基序的转录辅激活因子;;槟榔碱
基金资助：国家自然科学基金面上项目(编号：82374530);; 湖南省教育厅科研项目自然科学类(编号：24B0340);; 湖南中医药大学校院联合基金(编号：2024XYLH016);湖南中医药大学口腔医学一级学科开放基金重点项目(编号：2019KQYX09)
