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作者：饶泽昌;桂明明;黄胜和;徐婧怡;刘雅坤;鄢文瑄;许建丰;
单位：南昌大学抚州医学院;抚州医药学院/江西省教育厅建昌帮中药研究重点实验室;
摘要：目的：克隆与分析斑地锦Em4CL2a基因及其启动子，为解析斑地锦优良品质的形成机制提供依据。方法：采用RACE和Tail-PCR技术，克隆Em4CL2a基因ORF区及启动子序列，并进行生物信息学分析；应用qRT-PCR分析不同生长期斑地锦茎秆组织的表达模式；构建并鉴定原核蛋白表达重组质粒pET-32a(+)-Em4CL2a。结果：获得的Em4CL2a基因ORF长度为1 674 bp(登录号：OR944055),启动子长度为1 404 bp(登录号：PP779128)。该基因编码557个氨基酸，其编码蛋白含保守域BoxⅠ/Ⅱ及有两个跨膜结构，与南欧大戟、麻风树亲缘关系最近。Em4CL2a基因在开花后20～60 d特异性高表达，此阶段是槲皮素合成关键期。成功构建pET-32a(+)-Em4CL2a重组质粒，并通过SDS-PAGE验证其在大肠杆菌中成功表达。结论：该研究成功克隆并初步解析了Em4CL2a基因的功能，丰富了4CL基因家族资源，为进一步开发利用该基因奠定了基础。
关键词：斑地锦;;4-香豆酰辅酶A连接酶;;Em4CL2a基因;;启动子;;RT-qPCR;;原核表达
基金资助：江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ218111);; 南昌大学抚州医学院校级科技重点项目(fykj202502)
