来源：期刊VIP网 时间：
作者：邹何元;梁莹莹;吴文如;江珮瑜;张雨薇;来慧丽;
单位：广州中医药大学中药学院;深圳市药品检验研究院/国家药品监督管理局中药质量研究与评价重点实验室;广东食品药品职业学院;
摘要：目的：针对土鳖虫药材中雌雄地鳖个体混用的现象，建立一种快速、准确的地鳖性别分子鉴定方法，为其药材质量控制提供技术支持。方法：利用Illumina高通量测序技术，分别测定雌、雄地鳖成虫线粒体基因组全序列；比对分析雌、雄个体间的线粒体基因组差异位点，并进行测序验证及酶切位点分析；基于特异酶切位点，建立PCR-RFLP分子鉴定方法。结果：成功获得雌、雄地鳖各3条线粒体基因组序列，全长均为15 551 bp,雌、雄个体间存在3个稳定的碱基差异位点(第4 113、4 413、8 262位点)。基于差异位点所在片段设计的两对通用引物能够有效扩增目标序列，进一步利用EcoT14 I酶切位点成功建立了PCR-RFLP鉴定体系，该方法可在2.5 h内完成地鳖样品的性别鉴定。结论：该研究所建立的PCR-RFLP性别鉴定方法，准确度高，方便、快捷，为土鳖虫药材性别的质量控制与标准的制定提供了可行的技术方案。
关键词：土鳖虫;;地鳖;;线粒体基因组;;性别鉴定;;聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性
基金资助：国家中医药管理局张丹雁全国老药工传承工作室建设项目(国中医药人教函[2024]255号);; 2024年广东食品药品职业学院科研项目(2024ZR27);; 广州中医药大学大学生创新创业训练计划项目(202410572308);; 2024年广东省研究生教育创新计划项目(2024ANLK＿018)
