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作者：欧阳一凡;刘锋;李坤;孙普;曹轶梅;马雪青;李凤娟;白兴文;袁红;卢曾军;李平花;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;
摘要：构建一种稳定表达抗口蹄疫病毒（FMDV）IgA抗体的CHO-K1细胞系，为未来IgA和分泌性IgA(sIgA)的抗病毒研究奠定基础。以前期构建的抗O型和A型FMDV IgA的重链表达质粒和轻链表达质粒为模板，分别扩增IgA的重链和轻链基因，并克隆至慢病毒载体pLVX-Puro和pLVX-Hygro上，分别构建表达IgA重链和轻链的慢病毒质粒8GK-Puro和8GH-Hygro。将构建正确的轻、重链慢病毒质粒以及包膜质粒pMD2.G和包装质粒pCMV-dR8.74共转染HEK-293T细胞包装慢病毒。收获包装的慢病毒并感染CHO-K1细胞，用嘌呤霉素和潮霉素B以及有限稀释法筛选稳定表达IgA抗体的CHO-K1细胞系。用RT-PCR、间接免疫荧光试验和Western-blot分别从基因水平和蛋白水平分析筛选的细胞系。结果表明，IgA抗体编码的重链和轻链基因存在于细胞系基因组中，且IgA抗体的重链和轻链均可在细胞系中稳定表达。成功构建的稳定表达抗O型和A型FMDV IgA抗体的细胞系，为抗FMDV IgA和s IgA的抗病毒研究以及未来抗FMDV药物的研发奠定了前期基础。
关键词：口蹄疫病毒;;IgA抗体;;细胞系;;中和活性
基金资助：兰州市创新创业项目（2024-HL-7）;; 国家重点研发计划项目（2023YFD1802501）
