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作者：杨纯;胡鑫;陈梦娇;张随;张元元;程晶;周林宜;王真;臧京帅;李永清;刘文晓;
单位：北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病研究中心;北京农学院;北京市昌平区动物疫病预防控制中心;新疆农业大学;北京森康生物技术开发有限公司;英国帕布莱特研究所;
摘要：本研究旨在制备鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2蛋白的特异性单克隆抗体（m Ab），建立高灵敏度阻断ELISA方法，为IBDV疫苗研发及抗体检测提供技术支撑。本试验以IBDV VP2蛋白免疫BALB/c小鼠，通过脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合并筛选杂交瘤细胞株；采用Western-blot、间接免疫荧光（IFA）和中和试验鉴定单克隆抗体特性；以VP2为包被原、以2F11为检测抗体，优化阻断ELISA反应体系，通过ROC曲线确定临界值，并与商品化试剂盒比较符合率。获得两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株1D6(Ig G2a)和2F11(Ig G1)，其中2F11具中和活性。Western-blot与IFA证实二者均特异性结合VP2蛋白及鸡胚成纤维细胞（CEF）感染的IBDV。建立的阻断ELISA最佳条件为：VP2包被浓度0.015μg/m L、2F11浓度0.034μg/m L、2%BSA溶液封闭。该方法灵敏度95.24%、特异性97.61%(AUC=0.978)，临床样本检测总符合率达97.5%。本文成功制备IBDV VP2特异性单克隆抗体，基于2F11建立的阻断ELISA具有高灵敏度和可靠性，为IBDV抗体监测及新型疫苗评价提供了高效工具。
关键词：鸡传染性法氏囊病病毒;;VP2蛋白;;单克隆抗体;;阻断ELISA
基金资助：国家自然科学基金青年基金项目（32402874）;; 北京公派出国人才培养专项（202409110116）
