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作者：狄娜;杨金玲;高鹏程;彭婕;李学瑞;储岳峰;
单位：甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;河北农业大学动物医学院;
摘要：为建立检测产气荚膜梭菌（Cp）ε毒素抗体的竞争酶联免疫吸附（ELISA）检测方法，首先利用纯化的产气荚膜梭菌ε毒素重组蛋白免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术筛选并获得1株稳定分泌特异性抗体的单抗6B9。再以Cp ε毒素重组蛋白为包被抗原，6B9为竞争性抗体，HRP-山羊抗小鼠Ig G为二抗，通过优化反应条件，建立了Cp ε毒素抗体的竞争ELISA检测方法。结果显示，蛋白包被质量浓度为3.0μg/m L，待检血清不稀释，单抗1∶12 000稀释，二抗1∶20 000稀释，避光显色15 min为所建立竞争ELISA方法的最优反应条件。用该方法检测羊血清样本的阳性临界值为27.048%，阴性临界值为19.373%，检测羊阳性血清的敏感度为1∶1 024，批间、批内试验变异系数均小于10%。与Cp的α、β1、β2毒素，腐败梭菌、大肠杆菌以及支原体阳性血清均无非特异性反应。检测126份临床绵羊血清样品，该竞争ELISA方法与间接ELISA方法的阳性符合率为88.52%，阴性符合率为96.92%，总符合率为92.86%。结果表明，本研究成功获得1株高特异性的产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体，并据此建立了产气荚膜梭菌ε毒素抗体竞争ELISA检测方法。该方法重复性佳、特异性强、灵敏度高，从而为精准检测动物临床血清中的ε毒素抗体，评价动物梭菌疫苗的免疫效果提供了技术支撑。
关键词：产气荚膜梭菌;;ε毒素重组蛋白;;单克隆抗体;;竞争ELISA;;抗体检测
基金资助：新疆维吾尔自治区重大专项（2023A02007）;; 国家重点研发计划项目（2023YFD1802504-04）;; 兰州市科技计划项目（2023-1 14）;; 中国农业科学院创新工程项目（CAAS-ASTIP-2021-LVRI）
