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作者：任青峰;李伟伟;裴丹诗;王一卓;何路;朱兆宇;李熙忠;郑海学;范许许;万博;
单位：河南农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃农业大学生命科学技术学院;
摘要：旨在阐明ALKBH5基因通过m6A去甲基化酶功能在口蹄疫病毒（FMDV）复制中的作用与机制。通过CRISPR/Cas9技术成功构建了ALKBH5基因敲除的BHK-21细胞系，并经Western-blot验证敲除效率。CCK-8试验证实敲除后细胞活性无显著变化。分别用FMDV感染野生型与敲除型细胞后，检测发现ALKBH5敲除可显著提升病毒2C蛋白表达、病毒RNA转录水平及病毒滴度，表明其敲除促进FMDV复制。进一步的酶活性回补试验显示，回补野生型ALKBH5后可抑制病毒复制，而其酶活性关键位点突变体（R131A）则丧失该抑制能力，证明ALKBH5对FMDV复制的抑制作用依赖其去甲基化酶活性。本研究揭示ALKBH5作为宿主限制因子，通过m6A去甲基化负调控FMDV复制，为深入解析病毒感染机制及开发抗病毒新药物提供了理论依据。
关键词：ALKBH5;;口蹄疫病毒;;细胞系
基金资助：国家自然科学基金青年基金项目（32302857,32202781）;国家自然科学基金重点项目（32330107）;; 国家重点研发计划项目（2021YFD1800300）;; 中国博士后科学基金项目（2023M743830）;; 国家生猪产业技术体系项目（CARS-35,CARS-39-13）;; 国家生猪技术创新中心先导科技项目（NCTIP-XD/C03）;; 中国农业科学院创新计划项目（CAAS-CSLPDCP-2023002,CAAS-ASTIP-2023-LVRI）;中国农业科学院兰州兽
