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作者：叶银波;赵倩;黄丹妮;杨洋;孙波涛;程颜;刘永杰;秦晓东;郑海学;周斌;
单位：南京农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室;华南农业大学兽医学院;安徽农业大学动物医学院;
摘要：为制备非洲猪瘟病毒（ASFV）K205R蛋白单克隆抗体并鉴定其生物学特性，利用细胞融合技术制备抗体，通过免疫印迹、间接免疫荧光、免疫共沉淀试验验证抗体特异性，用间接ELISA测定抗体效价，并进行亚型鉴定，最后通过中和试验鉴定其病毒中和活性。结果显示，真核表达的K205R蛋白大小在23 k Da左右，与预测大小一致；筛选获得5株针对K205R蛋白的单克隆抗体细胞株，免疫印迹显示5株单克隆抗体对ASFV感染细胞样品中的K205R蛋白有较强的特异性反应，不与口蹄疫病毒感染样品发生交叉反应；间接免疫荧光试验进一步证实，5株单克隆抗体对细胞中转染或ASFV感染产生的K205R蛋白具有特异性识别能力；间接ELISA测定5株单抗的效价最高可达1∶819 200；亚型鉴定结果显示5株单抗的重链均为Ig G1，轻链均为Kappa；中和试验结果显示单抗A11-E11具有一定的病毒中和活性；免疫共沉淀试验进一步验证A11-E11株抗体能特异性结合ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中的K205R蛋白。综上所述，成功制备了针对ASFV K205R蛋白的单克隆抗体，该抗体对K205R蛋白具有较好的特异性，为进一步研究K205R蛋白的生物学功能奠定了基础，同时为非洲猪瘟诊断技术的建立提供了材料。
关键词：非洲猪瘟病毒;;K205R蛋白;;单克隆抗体;;细胞融合技术
基金资助：江苏省农业科技自主创新资金项目（CX(24)1010）;; 甘肃省联合科研基金重大项目（24JRRA806）
