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作者：王群;王宫璞;常凯;徐彪;肖西志;马萍萍;刘小卓;石文军;邵迪;姜帆;郑小龙;岳志芹;
单位：青岛海关技术中心;
摘要：为了制备赤羽病病毒（AKAV）核衣壳（N）蛋白的单克隆抗体，构建了AKAVN重组质粒pFastBacAKAV-N，并将其转化至DH10Bac感受态细胞，成功获得了重组杆粒Bacmid-AKAV-N。将Bacmid-AKAV-N转染至Sf9昆虫细胞后，拯救出能够稳定表达AKAV N蛋白的重组杆状病毒。将N蛋白纯化后免疫小鼠和家兔，分别制备抗N蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体。通过ELISA法测定多克隆抗体效价，并筛选获得了2株抗N蛋白的单克隆抗体阳性细胞株，分别命名为2G4和6C7。以制备的多克隆抗体作为包被抗体，HRP标记的2G4单克隆抗体作为检测抗体，优化建立了检测AKAV N蛋白抗原的双抗体夹心ELISA方法。该方法可特异性识别AKAV N抗原，为AKAV的临床抗原监测提供了可靠的技术支持。建立的单克隆抗体制备体系及双抗体夹心ELISA检测方法，为赤羽病的病原检测与流行病学调查奠定了重要基础。
关键词：赤羽病病毒;;N蛋白;;单克隆抗体;;多克隆抗体;;双抗体夹心ELISA
基金资助：国家重点研发计划项目(2021YFD1800500)
