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作者：薛晓峰;徐双媛;牛自艺;李彬;李基棕;索朗斯珠;
单位：西藏农牧大学动物科学学院农业农村部西藏包虫病防治重点实验室(部省共建);江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室;
摘要：本研究旨在获得猪源核糖体RNA加工蛋白1B(RRP1B)多克隆抗体并研究其与核糖体及核仁共定位情况。通过RT-PCR技术，扩增IPEC-J2中完整的RRP1B基因，构建pcDNA3.1(+)-RRP1B-His真核表达质粒，经测序鉴定后转染HEK-293T和IPEC-J2，采用间接免疫荧光试验（IFA）和Western-blot方法检测RRP1B表达情况。利用镍柱亲和层析法纯化带有His标签的重组RRP1B，以His-RRP1B作为免疫原，皮下注射BALB/c小鼠，制备多克隆抗体。通过Western-blot和IFA试验测定抗体效价，评价免疫原性。同时利用制备的多克隆抗体进行RRP1B与核糖体及核仁共定位试验。结果表明，重组质粒pcDNA3.1(+)-RRP1B-His能够在HEK-293T和IPEC-J2内表达。制备的重组RRP1B免疫小鼠可产生较高水平抗体，抗体效价可达1∶2 000以上；免疫荧光共定位试验发现RRP1B定位于核仁中，与核糖体没有明显共定位现象。本研究为后续研究RRP1B的生物学功能奠定了基础。
关键词：RRP1B;;多克隆抗体;;核糖体;;核仁;;共定位
基金资助：国家自然科学基金项目(32473119);; 江苏省自然科学基金项目(BK20221432)
