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作者：贺笋;季春辉;张慧敏;唐慧芬;肖升东;杜久斌;
单位：天康制药股份有限公司;
摘要：为构建稳定表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的CHO细胞系，为PEDV的诊断及亚单位疫苗的构建提供材料，本研究对PEDV S基因进行了遗传进化分析后将其插入UCOE-mu-p真核表达载体并通过脂质体转染法将其整合到CHO细胞基因组中，利用两轮嘌呤霉素加压筛选出稳定表达的PEDV S蛋白单克隆细胞系。同时利用SDS-PAGE、Western blot、HPLC和病毒中和实验对表达产物进行检测和鉴定。结果显示，筛选出的高表达细胞系在1～15代均表达稳定，且在此期间的表达量保持在0.61 g/L，SDS-PAGE、Western blot和HPLC结果均与预期相符，病毒中和实验结果显示免疫1月龄仔猪后中和抗体水平达到1∶60，为PEDV的诊断及亚单位疫苗的构建奠定基础。
关键词：猪流行性腹泻病毒;;CHO细胞;;S蛋白;;单克隆细胞系;;免疫原性
