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作者：武子华;牛世奇;马天馨;王晨阳;潘晟辉;苑纯秀;滕巧泱;李泽君;刘芹防;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所;
摘要：为建立禽呼肠孤病毒(ARV)变异株σC蛋白的抗体间接ELISA检测方法，本研究通过RT-PCR扩增了ARV变异株G4的σC蛋白基因，将其构建至原核表达pET28a(+)载体，经IPTG诱导表达和SDS-PAGE、Western blot验证。结果显示，大肠杆菌BL21能够可溶性表达G4-σC蛋白，将纯化后的σC蛋白作为包被抗原建立了变异ARV血清抗体的间接ELISA检测方法。结果表明，蛋白包被浓度7.81 ng/mL，最佳包被条件为37 ℃孵育2 h后4 ℃过夜；血清1600倍稀释后最佳反应时间1.5 h；酶标二抗最佳稀释度1∶2000，最佳反应时间1 h；阴阳性临界值为0.487；批内变异系数1.52%～6.75%，批间变异系数8.13%～9.50%，说明包被的ELISA板稳定且可重复；血清稀释6400倍检测结果为阳性，敏感性良好，与试剂盒阳性符合率达91.07%，说明该方法具有良好的特异性和实用性。本研究建立的ARV变异株ELISA检测方法为变异ARV的疾病诊断及疫苗研发提供了工具与支持。
关键词：ARV变异株;;σC蛋白;;原核表达;;ELISA
基金资助：自然科学基金面上项目(32172835)
