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作者：孟鑫;李松楠;王安铖;闫婉婉;李俊波;陈玲超;童武;孔宁;单同领;于海;童光志;邢明伟;郑浩;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所;东北林业大学野生动物与自然保护地学院;安徽农业大学生命科学学院;
摘要：为了制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的特异性单克隆抗体，本研究将p30分别克隆至真核和原核表达载体中，构建了重组的pcDNA3.1-p30以及pColdⅠ-p30质粒。将重组质粒pColdⅠ-p30转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中，经诱导和纯化获得p30蛋白。将其免疫小鼠，通过细胞融合、筛选、亚克隆获得1株阳性的杂交瘤细胞，命名为5E15。通过间接ELISA、Western blot以及间接免疫荧光鉴定其特异性。结果显示，单克隆抗体5E15识别真核和原核表达的p30重组蛋白。重组质粒pcDNA3.1-p30用于转染293T细胞，免疫荧光可观察到细胞膜上的特异性绿色荧光。本研究通过表达，纯化获得ASFV p30重组蛋白，并成功制备了1株抗p30的单克隆抗体，为p30蛋白功能研究和非洲猪瘟诊断研究提供了重要材料。
关键词：非洲猪瘟;;p30蛋白;;单克隆抗体;;原核表达;;真核表达
基金资助：国家重点研发计划项目(2021YFD1801300);; 上海市科技创新行动计划项目(20392002500)
