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作者：王建;郭洁真;王子涵;孙彤;陈鸿军;孙竹筠;陈丹清;
单位：江苏省常州市武进区畜牧兽医管理服务中心;中国农业科学院上海兽医研究所;
摘要：本研究成功构建了一种高特异性、高灵敏性的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR技术，用于检测猪内源性逆转录病毒(PERV)。基于GenBank中PERV的pol基因序列，本研究设计并筛选了特异性引物和探针，绘制标准曲线，同时对该方法的灵敏度、特异性、重复性及临床检测适用性等关键指标进行了评估。结果显示：质粒标准品Ct值与浓度间呈现优良的线性相关性(R~2=0.9995)；基于重组质粒pCDNA3.1-pol体外转录RNA的灵敏度试验显示，灵敏度达10 copies，比普通RT-PCR方法提高了两个数量级，表明该方法具有良好的灵敏度；同时，该方法与PRRSV、CSFV及PEDV等病原体核酸均未出现非特异性扩增，证明其具有良好的特异性；变异系数(CV)小于3%，表明该方法具有良好的重复性。本研究建立了一种针对PERV的灵敏性强、特异性高的检测方法，能对器官移植前供体的PERV诊断提供参考价值。
关键词：猪内源性逆转录病毒;;pol基因;;TaqMan探针;;实时荧光定量RT-PCR
基金资助：上海市2020年度“科技创新行动计划”实验动物研究领域项目(20140900300);; 2021—2022年增补常州市现代农业产业技术体系建设项目
